Центрофужната тръба е проста тръба, която може да издържи на висока скорост на въртене и налягане, като например отделяне на някои проби и отделяне на утайки от супернатанта.Ултрафилтрационната центрофужна тръба има две части, подобни на вътрешната и външната тръба.Вътрешната тръба е мембрана с определено молекулно тегло.По време на високоскоростно центрофугиране тези с по-малко молекулно тегло ще изтекат в долната тръба (т.е. външната тръба), а тези с по-голямо молекулно тегло ще бъдат уловени в горната тръба (т.е. вътрешната тръба).Това е принципът на ултрафилтрацията и често се използва за концентриране на проби.
Ултрафилтрационните центрофужни епруветки обикновено могат да се използват без предварителна обработка, но за обработка на протеинови проби, особено за разредени протеинови разтвори (< 10ug / ml), скоростта на възстановяване на концентрацията с ултрафилтрационни мембрани често не е количествена.Въпреки че PES материалите минимизират неспецифичната адсорбция, някои протеини, особено когато са разредени, може да имат проблеми.Степента на неспецифично свързване варира в зависимост от структурата на отделните протеини.Протеините, съдържащи заредени или хидрофобни домени, са по-склонни да се свържат необратимо с различни повърхности.Предварителната пасивна обработка на повърхността на ултрафилтрационната центрофужна епруветка може да намали загубата на протеинова адсорбция върху повърхността на мембраната.В повечето случаи предварителната обработка на колоната преди концентрирането на разредения протеинов разтвор може да подобри степента на възстановяване, тъй като разтворът може да запълни празните места за адсорбция на протеини, изложени върху мембраната и повърхността.Методът на пасивиране е предварително накисване на колоната с по-голям обем пасивиращ разтвор за повече от 1 час, измиване на колоната обилно с дестилирана вода и след това центрофугиране веднъж с дестилирана вода, за да се отстрани напълно пасивиращият разтвор, който може да остане върху филма .Внимавайте да не оставите филма да изсъхне след пасивиране.Ако искате да го използвате по-късно, трябва да добавите стерилна дестилирана вода, за да поддържате филма влажен.
Ултрафилтрационните центрофужни епруветки обикновено не могат да бъдат стерилизирани и използвани повторно.Тъй като цената на една епруветка не е евтина, много хора се опитват да я използват повторно – опитът е да почистите повърхността на мембраната с дестилирана вода много пъти и да я центрофугирате веднъж или два пъти.Малката епруветка, която може да се центрофугира в обратна посока, може да се потопи в дестилирана вода и след това да се центрофугира в обратна посока повече пъти, което ще бъде по-добре.Може да се използва за една и съща проба многократно и може да се накисва в дестилирана вода, когато не се използва, но трябва да се предотврати бактериално замърсяване.Не смесвайте различни проби.Някои хора казват, че накисването в 20% алкохол и 1n NaOH (натриев хидроксид) може да предотврати растежа на бактериите и да предотврати изсушаването.Докато ултрафилтрационната мембрана нахлува във водата, тя не може да бъде оставена да изсъхне.Други обаче казват, че това ще разруши структурата на мембраната.Във всеки случай производителите обикновено не поддържат повторно използване.Повтарящата се употреба ще блокира размера на порите на филтърната мембрана и дори ще причини изтичане на течност, което ще повлияе на експерименталните резултати.
Време на публикуване: 05 септември 2022 г